مراحل کلن کردن ژن:
.1استخراج ژن مورد نظر
.2انتقال ژن مورد نظر به ناقل مناسب
.3انتقال ناقل نوترکیب به درون سلول میزبان
.4گزینش سلول های تراریخت شده
.5تکثیر سلول های تراریخت شده
اهداف کلونینگ:
.1تولید انبوه یک پروتئین
مثال:انسولین انسانی هرمون رشد انسانی اینترفرون واکسن هپاتیت B اینترلوکین اریتروپوئیتین
- دستکاری مسیر های بیولوژیک جهت اصلاح محصولات گیاهی وحیوانی
مثال:تولید گوجه فرنگی که دیتر نرم ورسیده میشود
ابزار مورد نیاز برای کلونینگ:
•انزیم های برشی وانزیم های اتصال دهنده
•ناقلین کلونینگ
انزیم های برشی:
•این انزیمها اندونوکلئاز میباشند واز باکتری استخراج میشوند این انزیم ها در باکتری نقش دفاعی دارند
نحوه نام گذاری این انزیم ها:
•حرف اول: جنس
•حرف دوم وسوم: گونه
•حرف چهارم : نژاد
•عدد: ترتیب کشف انزیم از منبع
مثال :ECOR1
مثال :HIND3
مثال :BamH1
خصوصیات انزیم های برشی:
.1کوفاکتور:Mg 2+
.2توالی های پالیندرومی را شناسایی وبرش میدهند
.3نحوه برش به دو صورت است:1)ایجاد انتهای چسبان 2)ایجاد انتهای صاف
انزیم های اتصال دهنده:
•این انزیم ها برای اتصال ژن خارجی به ناقل استفاده میشوند
دو نوع انزیم انتصالی داریم:
.1Ecoli.DNA ligase
.2T4 DNA ligase
ناقلین کلونینگ:
•ناقلین کلونیگ باید دارای ویزگی های زیر باشند:
.1Ori داشته باشند
.2دارای ژن نشانگر باشند
.3دارای مکان برشی باشند
انواع ناقلین کلونینگ:
.1پلاسمید ها: PBR322 Puc pTi
.2باکتریوفاژ: M13 لامبدا
.3کاسمید
.4شاتل
.5کروموزو مصنوعی مخمر
شامل 40 اسلاید powerpoint
دانلود پاورپوینت کلون کردن ژن