دانلود پایان نامه ارشد رشته کشاورزی ارتباط چندشکلی ژن FSHBباصفات تولید مثلی درگاوهای نر هلشتاین ایران با فرمت ورد و قابل ویرایش تعداد صفحات 136
دانلود پایان نامه آماده
چکیده:
کاربرد تلقیح مصنوعی در صنعت گاو شیری امکان بهبود نتایج انتخاب گاوهای نر را برای صفات تولیدی فراهم می‌کند، اما در همان زمان، بر عملکرد تولید‌مثلی فردی گاو نر فشار وارد می‌کند. این مطالعه تلاش دارد تا اثر مستقیم عملکردی جایگاه کاندیدای FSHB را به عنوان نشانگر، بر روی صفات کیفی اسپرم از جمله حجم اسپرم، جمعیت اسپرم در هر میلی‌لیتر انزال، کل جمعیت اسپرم در هر انزال، جنبندگی اسپرم تازه، تعداد اسپرم متحرک در هر سی‌سی انزال، کل جمعیت اسپرم متحرک در هر انزال، جنبندگی اسپرم بعد از یخ‌گشایی، تعداد اسپرم متحرک در هر سی‌سی انزال بعد از یخ‌گشایی، کل جمعیت اسپرم زنده بعد از یخ‌گشایی، تعداد دز اسپرم تولیدی در هر انزال، نسبت جنبندگی اسپرم تازه به یخ‌گشایی شده ارزیابی نماید. از تعداد 83 نمونه خون و اسپرم از گاوهای نر موجود در دو مرکز تلقیح‌مصنوعی که بین سالهای 1362 تا 1385 متولد شده بودند، برای تعیین SNP ژن هورمون محرک فولیکول FSHB با روش PCR-RFLP با آنزیمPSTI استفاده شد.
مقدمه:
موفقیت برنامه‌های ژنتیکی درگاوهای شیری به طور عمده به وسیله ارزش گاوهای نر یابه عبارت بهتر به وسیله کیفیت اسپرم استفاده شده در هر دوره تولید مشخص می‌شود، بنابراین انتخاب گاوهای نرجوان مهمترین گام درهر برنامه پرورشی گاوها است بنابراین انتخاب سنتی از گاوهای نر به وسیله برنامه‌های تلقیح‌مصنوعی که بر پایه انتخاب شجره وتست فرزندان است در صفات دارای وراثت‌پذیری پایین با کاهش بازده روبرو است عبداله و مک دنیل، 2002 . در سالهای اخیر با توجه به پیشرفت‌های زیاد در فن‌آوری نشانگرهای ژنتیکی در شناسایی دقیق‌تر افراد کاندیدا مکینن وجرج، 1998 ، می‌تواند کارائی برنامه‌های انتخاب ژنتیکی را برای گاوهای شیری افزایش دهد
فهرست
چکیده .........................................................................................................................................................1
مقدمه..............................................................................................................................................................3
فصلاولمروریبرمنابع ........................................................................................................................6
1-1 آناتومی دستگاه تولید مثلی گاو نر ................................................................................................7
1-2 فیزیولوژی تولید مثلی گاو نر ......................................................................................................8
1-3 عوامل کنترل کننده کیفیت اسپرم .................................................................................................10
1-3-1عواملهورمونی .......................................................................................................10
1-3-1-1 GnRH..........................................................................................................................................10
1-3-1-2 گنادوتروپین‌ها و پرولاکتین...........................................................................................................11
1-3-1-3 تستوسترون و آندروژن................................................................................................................12
1-3-1-4 هورمون رشد................................................................................................................................12
1-3-1-5 انسولین ......................................................................................................................................13
1-3-1-6 گلوکورتیکوییدها و آلدسترون ...................................................................................................13
1-3-1-7 هورمون‌های تروییدی و PGF2α.................................................................................................14
1-3-2عواملغیرهورمونیموثربرکیفیت اسپرم.....................................................................................................14
1-3-2-1 عوامل ژنتیکی ...............................14
1-3-2-1-1محیطی .........................................................................................................................16
1-3-2-1-2تیم جمع آوری ..............................................................................................................16
1-3-2-1-3فاصله جمع آوری.....................................................................................................................17
1-3-2-1-4 فصل..........................................................................................................................................17
1-3-2-1-5حرارت.....................................................................................................................................18
1-3-2-1-6 سن دام .......................................................................................................................19
1-3-2-1-7تغذیه.........................................................................................................................................20
1-4 ارزیابی اسپرم.......................................................................................................................................21
1-4-1 خصوصیاتظاهریاسپرم...............................................................................................................22
1-4-2تحرکاسپرم...................................................................................................................................22
1-4-3 آکروزوم بی عیب...........................................................................................................................23
1-4-4مورفولوژیاسپرم ( شکلاسپرم )..................................................................................................23
1-4-5 ارزیابی اسپرم یخزده.......................................................................................................................24
1-4-6 غلظت اسپرم...................................................................................................................................25
1-5 صفات تولید مثلی مهم در اصلاح نژاد گاو نر.....................................................................................26
1-6 رویکردهای مولکولی برای بهبود تولید مثل در گاو............................................................................27
1-7 تجزیه و تحلیل ژنFSH کاندیدا................................................................................28
1-8 FSH......................................................................................................................................30
1-8-1 هورمون و تولیدمثل............................................................................................................ 32
1-8-1-2نقش هورمونFSHدر فعالیت بیضه‌ها.............................................................................. 33
1-8-2چندشکلی ها:............................................................................................................................ 35
1-8-2 -1ژن FSH......................................................................................................................................35
1-8-2-1 -1پلی مورفیسم ایزوفرم های گیرنده FSH....................................................................................36
1-8-2-1-2رخ دادن جهش های طبیعی از گیرنده FSH..............................................................................37
1-8-2-1-3 تشخیصSNPها در گیرنده FSH...........................................................................................37
1-8-2-1-4 تاثیر SNPها در تولید مثل.........................................................................................................38
1-8-2-1-5 اعمال فیزیولوژی FSHبا ترکیب بر اسپرم سازی....................................................................39
1-8-2-1-6 پلی مورفیسم گیرندهFSHوعملکرد بیضه ها..........................................................................42
1-8-2-1-7 چند شکلی در گیرنده FSH در گونه های حیوانی دیگر..........................................................42
فصل دوم مواد و روش.............................................................................................................................45
2-1 روند آزمایش.......................................................................................................................................46
2-2 مواد.....................................................................................................................................................46
2-2-1 حیوانات ........................................................................................................................................46
2-2-2 نمونه برداری..................................................................................................................................48
2-2-3 رکوردهای فنوتیپی.........................................................................................................................48
2-2-4 مواد و وسایل آزمایشگاهی...........................................................................................................48
2-2-4-1 تجهیزات...................................................................................................................................49
2-2-4-2 مواد شیمیایی و کیت‌ها و شرکت سازنده.................................................................................49
2-2-4-3 محلولها و بافرها.....................................................................................................................52
2-2-4-4 آغازگرهای مورد استفاده..........................................................................................................54
2-3 روش‌ها............................................................................................................................................54
2-3-1 صفات مورد بررسی.....................................................................................................................54
2-3-1-1 ارزیابی صفات کیفی اسپرم......................................................................................................54
2-3-1-1-1 حجم اسپرم.........................................................................................................................54
2-3-1-1-2 جمعیت اسپرم در هرمیلی لیتر انزال...................................................................................54
2-3-1-1-3جمعیت کل در هر انزال....................................................................................................54
2-3-1-1-4 جنبندگی اسپرم تازه و یخ گشایی شده.............................................................................55
2-3-1-1-5 تعداد کل اسپرم زنده قبل انجماد......................................................................................55
2-3-1-1-6 تعداد کل اسپرم زنده بعد از یخ گشایی............................................................................55
2-3-2 روش‌های ژنتیک مولکولی........................................................................................................55
2-3-2-1 استخراج DNA....................................................................................................................55
2-3-2-1-1 استخراج DNA از نمونه‌های خون.................................................................................55
2-3-2-1-2 استخراج DNA از نمونه‌های اسپرم...................................................................................56
2-3-2-1-3 نگهداری DNA استخراج شده..........................................................................................58
2-3-2-1-4 تعیین کمیت و کیفیت DNA استخراج شده......................................................................58
2-3-2-2 واکنش زنجیره‌ای پلی مرز......................................................................................................59
2-3-2-3 تعیین ژنوتیپ.........................................................................................................................60
2-4 تجزیه و تحلیل آماری ..................................................................................................................61
2-4-1 تجزیه و تحلیل ژنوتیپ‌ها..........................................................................................................61
2-4-1-1 محاسبه فراوانی‌های اللی و ژنوتیپی.......................................................................................61
2-4-1-2 آزمون تعادل هاردی-واینبرگ................................................................................................61
2-4-2تجزیه و تحلیل ارتباط بین ژنهای کاندیدا و صفات مورد بررسی.............................................61
2-4-2-1 مدل آماری برای صفات با توزیع پیوسته...............................................................................62
2-4-2-2 مدل آماری برای صفات با توزیع گسسته..............................................................................62
فصل سوم نتایج و بحث......................................................................................................................64
3-1 خلاصه آماری صفات مورد بررسی ...............................................................................................65
3-2 نتایج تجزیه واریانس عوامل موثر بر کیفیت منی.............................................................................66
3-2-1فراوانی آللی و ژنوتیپی................................................................................................................68
3-2-1-1-1بررسی ارتباط جایگاه FSHB ژن هورمون محرک فولیکول با صفات مورد بررسی ...........70
3-2-1-1-2دلایل احتمالی تاثیر جایگاهFSHBبر روی صفات مورد ب.............................................73
3-2-2اثر فصل اسپرم‌گیری ................................................................................................................75
3-2-3 اثر متقابل فصل اسپرم‌گیریبا ژن هورمون محرک فولیکول......................................................79
4- نتیجه گیری......................................................................................................................................84
5- پیشنهادات........................................................................................................................................85
6- منابع.................................................................................................................................................86
7- چکیده انگلیسی............................................................................................................................114
فهرست جدول‌ها
عناوینصفحه
جدول 1-1مقادیر وراثت‌پذیری صفات مختلف کیفیت اسپرم در گاو...................................................................15
جدول 1-2 صفات تولید‌مثلی مهم در اصلاح‌نژاد گاو..................................................................................26
جدول2-1 مواد شیمیایی و کیت‌های مورد استفاده............................................. ........................................50
جدول 2-2 ترکیبات محلولها و بافرهای مورد استفاده.................................................................................52
جدول2-3 برنامه تکثیر ژن FSHBدر دستگاه ترموسایکلر..........................................................................60
جدول 2-4 شرایط برش قطعات حاصل تکثیر برای تعیین ژنوتیپ..............................................................60
جدول 3-1 خلاصه آماری صفات مختلف مورد بررسی............................................ ...................................65
جدول3-2 آثار موثر بر کیفیت اسپرم در گاوهای نر هلشتاین ایران.................................. ..........................67
جدول3-3 فراوانی اللی و ژنوتیپی و آزمون کای مربع برای جایگاهFSHB................................ ..............69
جدول3-4برآورد میانگین حداقل مربعات ژنوتیپ‌های مختلف در جایگاهFSHB و ارزش P مقایسه میانگین با استفاده از آزمون توکی برای صفات مورد بررسی در گاوهای نر هلشتاین ایران........................73
جدول3-5 میانگین حداقل مربعات و انحراف معیار صفات کیفی اسپرم در فصل اسپرم‌گیری مختلف سالجمعیت گاوهای نر هلشتاین ایران..............................................................................................................78
جدول3-6میانگین حداقل مربعات و انحراف معیار صفات کیفی اسپرم دراثرمتقابل فصل اسپرم گیری با ژنهورمون محرک فولیکول در جمعیت گاوهای نر هلشتاین ایران.............................................................83
فهرست اشکال
عناوین صفحه
شکل1-1 انواع الل گیرنده ژنFSH............................................................................................................45
شکل 2-2 شمای کلی استراتژی آزمایش...............................................................................................47
شکل 3-1 ژنوتیپ‌های ژن FSHBدر جایگاه PSTI بر روی ژل آگاروز 3 درصد.......................................69
پایان نامه ارشد رشته کشاورزی ارتباط چندشکلی ژن FSHBباصفات تولید مثلی درگاوهای نر هلشتاین ایران